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倒置顯微鏡應(yīng)用

更新時(shí)間:2011-10-03點(diǎn)擊次數(shù):870

 

倒置顯微鏡應(yīng)用
主要儀器與試劑①倒置顯微鏡(目鏡中帶有計(jì)數(shù)框)。②樣品沉淀器由沉降柱③血球計(jì)數(shù)器。④合哥氏溶液。
試驗(yàn)方法
①樣品的采集及保存
水樣采集后用魯哥氏溶液保存,100 m1.水樣加1mL獸哥氏溶液并置于暗處。
②樣品沉淀
將沉降柱置于沉降板上,使沉降柱口與沉淀室口吻合,取1-20 mL水樣注入沉降柱(操作時(shí)不要形成旋渦),然后加蒸餾水至沉降柱口,用玻片將沉降柱口封好盡量避免有氣泡產(chǎn)生。將沉淀器靜置4 h使水樣沉淀,移動(dòng)沉淀器時(shí)要注意避免沉淀物非隨機(jī)分布。
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奧林巴斯顯微鏡
③樣品檢測
用玻片推去沉降柱及其中的上清液并將玻片蓋于沉淀室上,注意沉淀室內(nèi)不能有氣泡產(chǎn)生。將沉淀室放入顯微鏡載物臺,用目鏡中的計(jì)數(shù)框進(jìn)行長條計(jì)數(shù),統(tǒng)計(jì)經(jīng)過方框內(nèi)的藻類數(shù)量。隨機(jī)抽取沉淀室底板3-5條或?qū)φ麄€(gè)沉淀室進(jìn)行計(jì)數(shù),直到優(yōu)勢種類的計(jì)數(shù)X100個(gè)/mL。
變異系數(shù)
在水樣體積及計(jì)數(shù)條帶相同的前提下,倒置顯微鏡計(jì)數(shù)法的變異系數(shù)比血球計(jì)數(shù)法小.樣品E的變異系數(shù)較大是由于其優(yōu)勢種類為微囊藻,微囊藻具有偽空泡不易被沉淀,此外通常微囊藻群體中有大量的細(xì)胞個(gè)體,在計(jì)數(shù)時(shí)很容易產(chǎn)生誤差。而采用血球計(jì)數(shù)法是由于細(xì)胞密度大,且不易出現(xiàn)大的群體,故變異系數(shù)較小。
準(zhǔn)確度
采用倒置顯微鏡計(jì)數(shù)法時(shí)對整個(gè)沉淀室((s咖3IIlIll)進(jìn)行隨機(jī)抽樣,而血球計(jì)數(shù)法僅對1 nm3的樣品室進(jìn)行抽樣,可見在選擇了恰當(dāng)?shù)乃畼芋w積和計(jì)數(shù)條帶數(shù)后,倒置顯微鏡計(jì)數(shù)法可達(dá)到較高的準(zhǔn)確度,而血球計(jì)數(shù)法只有當(dāng)水樣中含有的浮游藻類密度非常高時(shí)才能得出統(tǒng)計(jì)學(xué)上可靠的數(shù)據(jù)。在檢測的5個(gè)樣品中,除E外,其他4個(gè)樣品采用倒置顯微鏡計(jì)數(shù)法檢出的平均藻類總數(shù)高于血球計(jì)數(shù)法的結(jié)果(由于E中微囊藻細(xì)胞密度過大及其種屬特性,在沉淀室中微囊藻細(xì)胞個(gè)體處于不同的層面,計(jì)數(shù)時(shí)很容易產(chǎn)生誤差)。
由此可見,倒置顯微鏡計(jì)數(shù)法可檢出樣品中的大多數(shù)種屬,能較為全面地反映樣品的種群分布情況,有利于對湖泊或水庫作進(jìn)一步研究。而血球計(jì)數(shù)法僅能檢出水樣中占優(yōu)勢的1-2個(gè)種群,一些常見的、數(shù)量較少的種屬則無法檢出。
采用倒置顯微鏡計(jì)數(shù)法檢測水中的浮游藻類,水樣量小、準(zhǔn)確度高、變異系數(shù)小,能較為全面地反映樣品的種類分布情況,且操作簡單易行。檢測中應(yīng)注意以下幾方面:移去上清液時(shí)沉淀室內(nèi)不能有氣泡存在,以免影響計(jì)數(shù)結(jié)果;移動(dòng)沉淀室時(shí)要避免傾斜,以免造成藻類在沉淀室底板非隨機(jī)分布;選取適當(dāng)?shù)乃畼芋w積及計(jì)數(shù)條帶以獲得較高的準(zhǔn)確度。