暗視野顯微鏡的原理及特點
暗視野顯微鏡又被稱作暗場顯微鏡,是一種通過觀察樣品受側(cè)向光照射時所產(chǎn)生的散射光來分辨樣品細(xì)節(jié)的顯微鏡。 暗視野顯微鏡適用于檢查未染色標(biāo)本的形態(tài)及其運動能力。
原理和結(jié)構(gòu)特點:
暗視野顯微鏡和普通的明視野顯微鏡區(qū)別在于它們的聚光器有所不同。暗視野顯微鏡裝有一個*遮暗的聚光器,使光線不能通過聚光器,而只能從聚光器四周及未遮暗的部位斜射到載玻片的標(biāo)本上。同時因光線是斜射的,不能進入物鏡,而使得觀察的視野也是暗的,而聚光器斜射到菌體上的光線,則因光的散射作用而使菌體發(fā)亮,再反射至物鏡內(nèi),這樣在顯微鏡中則可見到暗視野中明亮的影像。
操作方法:
1)使用研究級暗視野顯微鏡,或?qū)⑵胀ü鈱W(xué)顯微鏡上的聚光器取下來,裝上暗場聚光器;
2)不論使用的是干燥物鏡還是油浸物鏡,在進行鏡檢時都應(yīng)在聚光器的上透鏡上,加上一滴香柏油;
3)將制作好的細(xì)菌懸滴標(biāo)本片放置于載物臺上,然后上升聚光器至頂部,使油與載玻片相接觸;
4)放大光源;
5)進行聚光器光軸調(diào)節(jié)及調(diào)焦;首先用10×物鏡找到被檢物像,然后調(diào)小聚光器虹彩光圈,直至可在視野中看到視場光闌的輪廓,再上下細(xì)致調(diào)整聚光器,這樣會使視場光闌的影像變得更為清晰,同時,如視場光闌不在場*,則可利用聚光器外側(cè)的兩個調(diào)節(jié)鈕進行調(diào)整,當(dāng)亮光點到達場*后,再將其調(diào)大,方可進行觀察。
注意事項:
1)暗視野觀察所用物鏡的數(shù)值孔徑一般適宜在1.00—1.25左右,建議使用帶視場光闌的物鏡,通過隨意轉(zhuǎn)動物鏡中部的調(diào)節(jié)環(huán),可輕松改變數(shù)值孔徑的大小。
2)更要求使用的載玻片和蓋玻片必須無劃痕、無灰塵,且物鏡前透鏡也必須潔凈無塵。同時載玻片與蓋玻片的厚度也應(yīng)符合標(biāo)準(zhǔn)。
3)鏡檢時室內(nèi)的光線應(yīng)較暗,如果達不到這樣的條件,也應(yīng)盡量使用遮光裝置,以更好的阻止目鏡周圍有光線射入。
4)在進行油鏡的鏡檢時,由于油內(nèi)的雜質(zhì)和氣泡產(chǎn)生的漫反射,可能會影響視場的鏡檢效果,所以必須盡量先清除掉油內(nèi)的雜質(zhì)和氣泡等。
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